【产品介绍】
        本试剂盒用于对人类白细胞抗原(Human Leukocyte Antigen, HLA)编码基因HLA基因复合体的HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DRB1和HLA-DQB1基因位点进行高分辨率基因分型。本试剂盒的使用人员为经过医学检验培训的专业人员,熟悉并了解医学分子生物学检测方法和高通量测序(High-Throughput Sequencing)的操作。高通量测序又名下一代测序(Next Generation Sequencing,NGS),是相对于传统的桑格测序(Sanger Sequencing)而言的。
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        本试剂盒采用Next Generation Sequencing(NGS)测序方法对HLA基因进行分型,技术的核心是4种荧光标记寡核苷酸的连接反应测序。测序之前,针对HLA位点特异性制备扩增混合液,与Taq聚合酶和样本基因组DNA进行各个位点特异性的DNA扩增。对扩增产物进行等比混合,酶法打断,用磁珠纯化后,3’和5’端分别加上接头,这些接头会使DNA片段随机结合到附着于玻璃表面(Flow cell),并且在固相的表面经过桥式扩增。这样就形成了数千份相同的单分子簇,被用做测序模板。测序采取边合成边测序的方法,和模板配对的ddNTP原料被添加上去,不配对的ddNTP原料被洗去,成像系统能够捕捉荧光标记的核苷酸。随着DNA 3' 端的阻断剂的去除,下一轮的延伸就可以进行。测序结果在计算机软件辅助下完成HLA等位基因分型。
NGS-1
【NGS原理】
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NGS-4
NGS-5
【NGS的HLA分型流程图】
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【NGS技术进行HLA分型示意图】
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【建库后DNA结构】
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【数据分析】
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